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饲料霉菌毒素检测技术

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发布时间:

2020-03-02

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霉菌毒素是一种有毒的次级代谢产物,主要由曲霉菌属、青霉菌属和镰刀菌属等真菌在生长过程中产生。霉菌毒素无色无味,在作物生产和农产品储存过程中都会产生,对动物和人体产生巨大的危害。目前已经发现,大约有300多种真菌代谢产物有毒害作用,对畜牧业形成严重威胁,如何快速、准确的检测毒素含量对指导饲料进行霉菌毒素的防控具有重要意义,本文简述了几种霉菌毒素的检测技术,为霉菌毒素的防控提供参考。

 

1. 薄层色谱法(Thin Layer Chromatography,TLC)

 

薄层色谱法是以涂布于支持板上的支持物作为固定相,以合适的溶剂为流动相,对混合样品进行分离、鉴定和定量的一种层析分离技术。是建立最早的一种霉菌毒素检测方法,具有成本低、操作简单等特点,而且对仪器设备和检验人员的要求不高。TLC根据样品理化性质的不同,选择适宜的提取剂,用于霉菌毒素的提取,产物在薄层板上层析分离和展开。我国国家标准依然采用此法检测饲料和饲用谷物原料中赭曲霉毒素的含量(GB/T 19539-2004)和食品中黄曲霉毒素的含量(GB 5009.22-2016)等。

 

2. 液相色谱法(High Performance Liquid Chromatography,HPLC)

 

HPLC法是当前检测霉菌毒素最常见的的方法,它以液体为流动相,流动相泵入装有固定相的色谱柱,在柱内各成分被分离后进行检测。HPLC法有分析速度快、灵敏度高、检测限低、易于规范化操作,重复性好等优点,具有广泛的适用性,HPLC法已成为实验仪器设备比较完善的实验室常用的分析方法。目前饲料卫生标准中霉菌毒素的检测均采用液相色谱法(GB 13078-2017)。

 

3. 气相色谱法(Gas Chromatography,GC)

 

GC法具有与HPLC一样的优势,如分离速度快、灵敏度高等优点,但气相色谱只适用于挥发性较大同时热稳定性较高的物质的分离检测,所以现主要用于镰刀霉菌毒素和展青霉素等的检测。

 

4. 酶联免疫吸附法(ELISA)

 

ELISA法是利用免疫学原理,将已知抗原吸附在酶标板上,加入酶标抗体和样品提取液均匀混合,充分反应后洗去多余抗体,加入底物,产生 显色反应,最后加入终止液终止,用酶标仪测定 酶底物的降解量,参照标准曲线计算试样中的抗原含量。ELISA由于操作简单、检测速度快, 成本低,使用安全适用于大批量样品的快速检测。但由于抗体的制备较困难,限制了该检测方法的应用。目前饲料中黄曲霉的检测有此方法(GB/T 17480-2008),部分地方标准也有此方法。

 

5. 免疫层析法(Immu-nochromatography as say,ICA)

 

免疫层析法(ICA)是以免疫学为基础发展起 来的一种检测方法,它具有检测面广、操作方便、 快捷迅速、特异性强、灵敏准确、携带方便、安全环保、经济实用等优点,特别适于大批量样本的 快速检测和基层使用,具有广阔的应用前景。目前,胶体金免疫层析(GICA)就是以胶体金作为示踪标志物,应用于抗原抗体反应中的一种新型免 疫标记技术,目前胶体金技术广泛用于霉菌的筛查,如饲料黄曲霉毒素测定(NY/T 2550-2014),但在实际应用中也出现假阳性、假阴性、检测灵敏度不高、检测范围扩大等现象。

 

6. 其他检测技术

 

随着分子生物学技术的快速发展,PCR技术也应用到霉菌毒素分析和检测中。该方法具有高效、快捷且 成本低等优点;另外最近几年噬菌体展示技术 (PDT)也应用到饲料安全快速检测体系中,利用PDT技术先后得到霉菌毒素的模拟表位肽。利用模拟表位肽替代试纸条显色区中相应的毒素-载体蛋白,不但可以增加检测人员的操作的安全性,也减少了霉菌毒素对环境的污染,而且该方法安全、快速,降低了检测成本。

 

在霉菌毒素危害的防控中快速、精确、低成本的检测方法是当今需解决的热点问题。现有的检测方法各有优缺点,随着科学技术的不断进步,特别是免疫学、分子生物学的不断发展,霉菌毒素检测技术必将更加快速准确、操作简单,为加强饲料安全的控制,保证国人身体健康提供有力保障。

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